CHO细胞高密度瞬时转染
Hi-KDCHO-K(K03205K)为新葡的京集团3512vip官网自主开发的重组蛋白CHO细胞超高密度瞬转表达系统,与新葡的京集团3512vip官网从CHO-K1细胞中所筛选驯化的CHOK1-Hi细胞配合使用可较大幅度提高重组蛋白的CHO细胞表达量。
该系统包括CHO细胞超高密度培养液、转染试剂、蛋白表达增强剂以及植物蛋白胨营养添加剂。
瞬时转染
1.将处于对数生长期的CHOK1-Hi细胞离心重悬至20×10^6个/ml的密度,震
荡培养1小时后从培养箱中取出进行转染;
2.转染时直接添加质粒至细胞培养中(按终浓度17ug/ml计算),充分摇匀
后,再添加转染试剂(TA-CHO)(添加量按终浓度35ug/ml计算),充分混匀
后将其放回培养箱中进行培养;
3.在培养箱中培养5小时后,以体积为2:1的比例(2份Hi- KDCHO,1份转染
细胞悬液)用Hi-KDCHO培养液将转染后的细胞稀释后,放回培养箱中培养。
产物表达与检测
1.转染24小时后加入细胞蛋白表达增强剂KE-CHO和营养补充剂KT-Feed,以
增加产物表达量;
2.待转染后的细胞生长至10×10^6个/ml时(一般为接种后的1~2天),需每
天添加1g/L的葡萄糖,若细胞生长至20×10^6个/ml时(一般为接种后的4~6
天),葡萄糖的添加量可加倍;
3.转染后第5-7天测定产物表达量,客户可根据细胞状态及表达量选择适宜的收
获时间。
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