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本系统适合于HEK-293细胞及其它293细胞的高密度悬浮培养、DNA瞬时转染及蛋白表达。

本实验方法根据HEK-293细胞的锥形瓶悬浮培养经验总结而成，也适用于其它悬浮培养方式的293细胞的DNA转染及蛋白表达。

转染细胞的准备

1、转染前需确定细胞密度及存活率。为确保转染效果，建议使用生长处于指数期（密度约为2~4×10^6个/毫升）、存活率大于98% 的细胞；

2、转染前细胞无需离心。若细胞密度为2.0×10^6个/ml时，则可直接转染，若细胞密度>2.0×10^6个/ml，则需兑入新鲜的KOP293培养液，将细胞密度稀释成2×10^6个/毫升。客户也可根据自身经验摸索合适的转染密度；

3、细胞准备好后恒温震荡培养10min后开始转染（5%CO2，37℃、120rpm）。

瞬时转染（以转染100ml细胞悬液为例）

1、准备两支15ml无菌离心管，在其中一支中加入5ml KPM和100μg无菌质粒DNA，轻轻吹打混匀。取另一支离心管，加入5ml KPM和500μl TA-293转染试剂，轻轻吹打混匀；

2、将含有转染试剂的离心管中所有液体转移至含质粒的离心管中，轻轻吹打混匀；

3、将质粒-载体复合物室温下静置孵育10分钟；

4、从恒温摇床中取出细胞，边摇边加入制备好的质粒-载体复合物，放回CO2恒温摇床中震荡培养。3小时后可根据需要加入适量抗生素。

产物表达与检测

1、转染24小时后加入600 μl 293细胞蛋白表达增强剂（KE-293），以增加产物表达量； 

2、可选择在转染24小时后添加一次瞬时转染营养添加剂(KT-Feed 50×)，适当提高产物的表达量； 

3、根据产品特性，在转染后第2至6天测定产物表达量； 

4、多数重组蛋白的表达量在转染后第6天左右可达到最高值，客户可根据细胞状态及表达量选择适宜的收获时间。

原文链接：https://mp.weixin.qq.com/s/Q4PuGkGigGXaZKg3WyW7DA

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